Η τεχνική της Ισοθερμικής Ενίσχυσης μέσω Βρόχου (LAMP) και η εξέλιξη της στη μικροβιολογία και υγιεινή των τροφίμων

Loop-amplified Isothermal Amplification and its evolution in food microbiology and hygiene (Αγγλική)

  1. MSc thesis
  2. Κυριαζής, Αναστάσιος
  3. Χημική και Βιομοριακή Ανάλυση (ΧΒΑ)
  4. 27 Φεβρουαρίου 2022 [2022-02-27]
  5. Ελληνικά
  6. 115
  7. Κωνσταντίνου, Αικατερίνη
  8. Σίδερης, Διαμάντης | Σγουρού, Αργυρώ
  9. Μικροοργανισμοί | Τρόφιμα | Ανίχνευση | Νουκλεϊκά οξέα | LAMP | PCR
  10. 170
  11. 0
    • Η σύγχρονη εποχή, παρόλα τα επιτεύγματα της επιστήμης και της τεχνολογίας κλονίζεται από μια σειρά τροφιμογενών νόσων που σύμφωνα με μελέτες υπολογίζονται σε 600 εκατομμύρια περιπτώσεις εκ των οποίων οι 420.000 καταλήγουν σε θάνατο, ενώ το 30 % αυτών συμβαίνουν σε παιδιά κάτω των 5 ετών (Στοιχεία Παγκόσμιου οργανισμού υγείας/WHO) δημιουργώντας παγκόσμιο πρόβλημα στην δημόσια υγεία. Οι νόσοι αυτές μπορεί να προληφθούν αν έχουν ληφθεί τα απαραίτητα μέτρα που αφορούν υγειονομικούς ελέγχους και λήψη μέτρων σε όλο το φάσμα που περιλαμβάνει τα τρόφιμα από το χωράφι και το κτήμα έως το τραπέζι του καταναλωτή. Η Eυρωπαϊκή Ένωση έχει θεσπίσει μέτρα για την έγκαιρη πρόληψη των τροφιμογενών νόσων, που βασίζονται σε συστήματα διασφάλισης της ποιότητας των τροφίμων για όλους τους μεσάζοντες που διανέμουν, μεταποιούν και επεξεργάζονται τα τρόφιμα και σε συνεργασία με τις εξελίξεις στην ανίχνευση και διατήρηση της υγιεινής των τροφίμων κατά των διαφόρων μικροοργανισμών υπάρχουν ικανοποιητικά σημάδια για σταδιακή μείωση των νόσων. Παρόλα τα παραπάνω, κρίνεται αναγκαίος ο έλεγχος των τροφίμων και αποτελεί αναπόσπαστο κομμάτι από την διαδικασία ελέγχου του, ο έλεγχος για νοθεία και για την ύπαρξη μικροοργανισμών και της προέλευσης τους, διαδικασία που γίνεται με εργαστηριακά μέσα διαφόρων τύπων. Από το μικροσκόπιο έως τις μοριακές μεθόδους τελευταίας τεχνολογίας όπως η LAMP, είναι αναγκαίος ο έλεγχος των τροφίμων προς όφελος της δημόσιας υγείας. Η παρούσα διπλωματική εργασία αφορά την παρουσίαση της Ισοθερμικής ενίσχυσης μέσω βρόχου ( LAMP/Loop-mediated Isothermal Amplification) και των παραλλαγών της (απλή, πραγματικού χρόνου, αντίστροφης μεταγραφής) και τις σύγχρονες εφαρμογές της στην μικροβιολογία και υγιεινή των τροφίμων παρουσιάζοντας τις σημαντικότερες χρήσεις της με γνώμονα την υπάρχουσα βιβλιογραφία. Ούσα μια νέα μέθοδος με αποδεδειγμένα χαρακτηριστικά που ταιριάζουν στην χρήση για την ασφάλεια των τροφίμων, έχει παρατηρηθεί παγκοσμίως μια ραγδαία ανάπτυξη των εφαρμογών της μεθόδου από το 2000 και ύστερα που ανακαλύφθηκε. Το πρώτο κομμάτι της εργασίας αφορά τους μικροοργανισμούς οι οποίοι βρίσκονται παντού στην φύση, τις πηγές επιμολύνσεως αυτών καθώς και άλλα χαρακτηριστικά, παρόλα αυτά δίνεται βαρύτητα στην σε αυτούς που επιμολύνουν τα τρόφιμα τα οποία μπορούν να τους δώσουν τις πηγές ενέργειας που αναζητούν. Στην συνέχεια γίνεται ανασκόπηση στις κυριότερες μεθόδους ανίχνευσης των μικροοργανισμών στα τρόφιμα δίνοντας ιδιαίτερη βαρύτητα στις μεθόδους με βάση την ενίσχυση νουκλεϊκών οξέων ξεκινώντας από την Αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (PCR) και των εφαρμογών της, καθώς και σε όλες τις μεθόδους ισοθερμικής ενίσχυσης νουκλεϊκών οξέων καταλήγοντας στην LAMP και στις κυριότερες σύγχρονες εφαρμογές της που βρίσκουν χρήση στα τρόφιμα τα τελευταία χρόνια.
    • Νowadays, despite the achievements of science and technology our world is shaken by a series of foodborne illnesses that are estimated to be over 6.000.000 cases of which 420.000 end in death. 30% of them occur in children under the age of 5 (Figures World Health Organization (WHO) creating a global public health problem. These diseases can be prevented if necessary measures are taken concerning a range of agricultural products which are consumed by the public. The European Union has recommended measures for the timely prevention of foodborne illnesses, based on food quality plans for all intermediaries including distributors, processors and sales in cooperation with the various government organisations concerned with the maintenance and food hygiene against various microorganisms. Despite the satisfactory signs for gradual reduction of diseases, food control is considered necessary and is an integral part of the process, spoilage control and the existence of microorganisms and its origin, a process that is done by laboratory methods of various types. From the microscope to state-of-the-art methods such as LAMP, it is necessary to inspect food for the benefit of public health. The present dissertation concerns the presentation of Loop Amplified Isothermal Amplification (LAMP) and its variants (real-time LAMP, reverse transcription LAMP) and its modern applications in microbiology and food hygiene, presenting its main uses based on the existing literature. As a new method with proven characteristics suitable for use in food safety, a rapid development of the applications of the method has been observed worldwide since its discovery in 2000.The first part of the work concerns microorganisms that are found everywhere in nature, their sources of contamination and other characteristics, however, emphasis is given to those who contaminate food which can give them the energy sources for their metabolic processes. Then the main methods of detection of microorganisms in food are reviewed, giving weight to the methods based on nucleic acid amplification starting from the polymerase chain reaction (PCR) and its applications, as well as to all the methods of isothermal amplification in comparison with LAMP and in its main modern applications that find use in food hygiene in recent years.
  13. Items in Apothesis are protected by copyright, with all rights reserved, unless otherwise indicated.