ΠΕΡΙΛΗΨΗ
Η μελέτη νουκλεϊκών οξέων και η εύρεση των δυνατοτήτων τους αποτελεί αντικείμενο έρευνας πολλών εργαστηρίων παγκοσμίως. Η σύνδεση τους με την εμφάνιση και τη συνέχιση ζωής, είναι ο κύριος λόγος έρευνας των νουκλεϊκών οξέων. Η σύσταση τους, οι λειτουργίες που επιτελούν, η συσχέτιση τους με μια σειρά νοσημάτων αλλά και η αξιοποίηση τους για την εύρεση θεραπειών είναι κάποιοι από τους λόγους που έχουν δημιουργηθεί και αναπτυχθεί τεχνικές ενίσχυσης τους. Η απομόνωση τους, δεν αρκεί τις περισσότερες φορές για να ανιχνευθεί και να μελετηθεί το εκάστοτε μόριο, συνεπώς με τη χρήση μοριακών και όχι μόνο μεθόδων, πραγματοποιείται ο πολλαπλασιασμός τους. Οι τεχνικές που θα μελετηθούν βασίζονται στην ικανότητα των ενζύμων να αντιγράψουν το δίκλωνο μόριο DNA, καθώς και να μεταγράψουν το RNA σε DNA. Η δυνατότητα αντιγραφής και μεταγραφής του γενετικού υλικού αποτελούν καθοριστικό σημείο, καθώς οι διαδικασίες αυτές που πραγματοποιούνται in vivo, πλέον πραγματοποιούνται και in vitro, μέσω πολλαπλής αντιγραφής και αντίστροφης μεταγραφής. Η εξέλιξη της τεχνολογίας και η ανακάλυψη της σημαντικότητας των νουκλεϊκών οξέων βοήθησε στην εξέλιξη πολλών τεχνικών βελτιστοποιώντας τις αποδόσεις τους και την αυτοματοποίηση τους.
Στην παρούσα εργασία παρουσιάζονται με βιβλιογραφικές αναφορές οι διαφορετικοί μοριακοί μέθοδοι ενίσχυσης των νουκλεϊκών οξέων. Αναπτύσσονται οι διάφορες εκδοχές της αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης και αναλύονται οι μεθοδολογίες καθώς και οι εφαρμογές τους. Παράλληλα αναφέρονται νέοι και σύγχρονοι μέθοδοι που στηρίζονται κυρίως στην αληλλούχηση των νουκλεϊκών οξέων. Η εύρεση της αλληλουχίας των νουκλεϊκων οξέων αποτελεί καθοριστικό βήμα τόσο για τη μελέτη τους, όσο και για τη μετέπειτα αξιοποίηση τους.
Ακόμη γίνεται αναφορά στους τρόπους απομόνωσης των νουκλεϊκών οξέων καθώς και στους οργανισμούς από τους οποίους μπορούν να προέλθουν. Αναλύονται τα χαρακτηριστικά των RNA και DNA και περιγράφονται οι λόγοι που χρησιμοποιούνται οι τεχνικές ενίσχυσης.
Abstract
The study of nucleic acids and finding their potential is the subject of research in many laboratories worldwide. Their association with the occurrence and continuation of life is the main reason for research on nucleic acids. Their composition, the functions they perform, their association with several diseases and their use in finding treatments are some of the reasons why amplification techniques have been created and developed. Their isolation is in most cases not sufficient to detect and study the molecules in question, so their amplification is carried out using molecular and other methods. The techniques to be studied are based on the ability of enzymes to copy the double-stranded DNA molecule, as well as to transcribe RNA into DNA. The ability to replicate and transcribe genetic material is a key point, as these processes, which are carried out in vivo, are now also carried out in vitro, through multiple replication and reverse transcription. The evolution of technology and the discovery of the importance of nucleic acids has helped in the development of many techniques by optimizing their performance and automation.
In this paper, the different molecular methods of nucleic acid amplification are presented with literature references. The different versions of the polymerase chain reaction are developed and the methodologies as well as their applications are discussed. At the same time, new and modern methods based mainly on nucleic acid sequencing are reported. The sequencing of nucleic acids is a crucial step both for their study and for their subsequent use.
It also refers to the ways of isolating nucleic acids and the organisms from which they can be derived. The characteristics of RNA and DNA are analyzed and the reasons for using amplification techniques are described.
