Διασφάλιση ποιότητας μοριακών διαγνωστικών εξετάσεων (με τη μέθοδο real time PCR), επικύρωση και επαλήθευση των δοκιμών και των αποτελεσμάτων με εσωτερικό και εξωτερικό ποιοτικό έλεγχο

Quality assurance of molecular diagnostic tests (with the method of real time PCR), validation and verification of tests and results with internal and external quality control (Αγγλική)

  1. MSc thesis
  2. Γκόλα, Δήμητρα
  3. Διαχείριση και Τεχνολογία Ποιότητας (ΔΙΠ)
  4. 13 Σεπτεμβρίου 2020 [2020-09-13]
  5. Ελληνικά
  6. 91
  7. Σαπίδης, Νικόλαος
  8. Σαπίδης, Νικόλαος | Πλατής, Αγάπιος
  9. Αλυσιδωτή Αντίδραση Πολυμεράσης | Real Time PCR | Εσωτερικός Έλεγχος Ποιότητας | Internal Quality Control (IQC) | Εξωτερικός Έλεγχος Ποιότητας | External Quality Control (EQC) | ISO 15189 | CE IVD
  10. 2
  11. 8
  12. Περιέχει : πίνακες, εικόνες
    • Η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης (Polymerase chain reaction, PCR) είναι ίσως η ευρύτερα χρησιμοποιούμενη μέθοδος της μοριακής βιολογίας, με αναρίθμητες εφαρμογές τόσο σε ερευνητικό όσο και σε διαγνωστικό επίπεδο. Αποτελεί μια απλή, ταχεία, επιλεκτική και εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδο πολλαπλασιασμού του γενετικού υλικού ενός οργανισμού. Η PCR πραγματικού χρόνου επιτρέπει τον ποιοτικό και τον ποσοτικό προσδιορισμό των μικροοργανισμών με μεγάλη ευαισθησία παρέχοντας σημαντική πληροφόρηση για την διάγνωση και θεραπεία λοιμωδών ασθενειών. Ωστόσο, η μέθοδος αυτή λόγω της μεγάλης ευαισθησίας απαιτεί εξαιρετική προσοχή ώστε να αποφευχθούν ψευδώς θετικά ή ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Τα εργαστήρια πρέπει να είναι σχεδιασμένα με τέτοιο τρόπο, ώστε να διασφαλίζεται η ορθότητα και ακρίβεια των αποτελεσμάτων. Ο εσωτερικός έλεγχος ποιότητας θα πρέπει να εφαρμόζεται σε όλα τα στάδια της μεθόδου. Με αυτό τον τρόπο μειώνεται η πιθανότητα λανθασμένης διάγνωσης που οδηγεί σε λάθος θεραπεία. Στην περίπτωση που υπάρχει λανθασμένο αποτέλεσμα να μπορεί ευκολότερα να εντοπιστεί σε ποιο στάδιο έγινε και να εξαλειφθεί. Κάθε εργαστήριο τα τελευταία χρόνια αποσκοπεί στη διασφάλιση ποιότητας η οποία στοχεύει στη βελτίωση των διαδικασιών που ακολουθούνται και στον έλεγχο τους. Όταν εφαρμόζεται αποτελεσματικά ένα σύστημα διαχείρισης ποιότητας, εξασφαλίζεται η ανάγκη για συνεπή, ακριβή και έγκυρα αποτελέσματα δοκιμών. Τα διεθνή πρότυπα ISO 15189:2012 και ISO 17025:2017 θέτουν τις απαιτήσεις ενός αποτελεσματικού συστήματος διασφάλισης ποιότητας. Μια από τις βασικές απαιτήσεις του ISO 15189 είναι το εργαστήριο να συμμετέχει σε εξωτερικό έλεγχο ποιότητας ο οποίος πραγματοποιείται από ανεξάρτητο φορέα και συμπληρώνει τον εσωτερικό έλεγχο ποιότητας. Η επιλογή αντιδραστηρίων για την ανίχνευση παθογόνων μικροοργανισμών εξαρτάται από τις απαιτήσεις και τις δυνατότητες του κάθε εργαστηρίου. Προτιμούνται μέδοθοι με άδεια διαγνωστικής χρήσης (CE/IVD), γιατί χρησιμοποιούνται με βάση τις οδηγίες του κατασκευαστή, έχουν συγκεκριμένες προδιαγραφές και μπορούν να παρέχουν συγκρίσιμα αποτελέσματα με άλλα εργαστήρια που εφαρμόζουν τις ίδιες μεθόδους. Υπάρχουν και μειονεκτήματα με βασικό, το μεγάλο τους κόστος σε σχέση με τις μεθόδους που αναπτύσσονται ενδοεργαστηριακά (in house). Στο εργαστήριο Μοριακής Διαγνωστικής επιλέχθηκαν αντιδραστήρια με άδεια διαγνωστικής χρήσης (CE/IVD), λαμβάνοντας υπόψη την επαναληψιμότητα και την αξιοπιστία των αποτελεσμάτων, την αυτοματοποίηση των διαδικασιών καθώς και τον έλεγχο ποιότητας σε κάθε στάδιο της διαδικασίας, σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Εφαρμόζεται ο εσωτερικός έλεγχος ποιότητας και όπως θα αναλυθεί στο 8ο κεφάλαιο της εργασίας αυτής αποτρέπει από ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Συμπερασματικά η Διασφάλιση της ποιότητας παρέχει τα απαραίτητα εργαλεία, ώστε να εντοπίζονται λάθη ή τυχόν παραλείψεις και να διορθώνονται άμεσα με τις λιγότερες συνέπειες. Ο εσωτερικός έλεγχος ποιότητας σε κάθε δοκιμασία διασφαλίζει την εγκυρότητα και την αξιοπιστία των αποτελεσμάτων. Η αναγκαιότητα για συγκρίσιμα αποτελέσματα, είναι ένα από τα κίνητρα για την εφαρμογή των διεθνών προτύπων.
    • Polymerase chain reaction (PCR) is perhaps the most widely used method of molecular biology, with innumerable applications at both research and diagnostic level. It is a simple, fast, selective and extremely sensitive method of multiplication of the genetic material of an organism. Real-time PCR allows the qualitative and quantitative identification of microorganisms with great sensitivity, providing important information for the diagnosis and treatment of infectious diseases. However, this method due to its high sensitivity requires extreme care to avoid false positive or false negative results.Laboratories must be designed in such a way as to ensure the accuracy and precision of the results. Internal quality control should be applied at all stages of the method. This reduces the chance of mis diagnosis leading to incorrect treatment. In case there is a wrong result it can be more easily identified at what stage it was done and eliminated. Every laboratory in recent years purposes at quality assurance which aims to improve the procedures followed and their control. When a quality management system is effectively implemented, the need for consistent, accurate and timely test results is ensured. The international standards ISO 15189: 2012 and ISO 17025: 2017 set the requirements for an effective quality assurance system. One of the basic requirements of ISO 15189 is the laboratory to participate in external quality control which is performed by an independent body and completes the internal quality control.The choice of reagents for the detection of pathogenic microorganisms depends on the requirements and capabilities of each laboratory. Methods with a in vitro diagnostic test (CE / IVD) are preferred, because they are used according to the manufacturer's instructions, have certain specifications and can provide comparable results with other laboratories that apply the same methods. There are also disadvantages with a basic, high cost in relation to the methods developed in vitro (in house). Reagents with a in vitro diagnostic test (CE / IVD) were selected in the Molecular Diagnostics laboratory, taking into account the repeatability and reliability of the results, the automation of the procedures as well as the quality control at each stage of the process, according to the manufacturer's instructions. Internal quality control is applied and as we will explain in the 8th chapter of this work it prevents false negative results. In conclusion, Quality Assurance provides the necessary tools to identify errors or omissions and correct them immediately with minimal consequences. Internal quality control in each test ensures the validity and reliability of the results. The need for comparable results is one of the motivations for the implementation of international standards.
  14. Attribution-NonCommercial-NoDerivatives 4.0 Διεθνές